产品货号：
MT0235
中文名称：
精准RCA扩增试剂盒
英文名称：
RealPrime RCA Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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RealPrime RCA与TruePrime RCA工作原理相同，采用引发酶（Primase Pol）来产生扩增引物。这种不使用随机引物的扩增方式，确保了对模板的精准扩增，避免引物带入的不确定碱基。PrimasePol结合在ssDNA上，以dNTP为底物合成短的互补引物，随后在高保真和持续合成能力极强的Modi-phi29 DNA聚合酶的作用下，持续合成ssDNA，其新合成的ssDNA又可以作为Primase Pol的结合底物重新合成互补引物，进而继续进行扩增，形成dsDNA。
本试剂盒中配备了dsDNA变性液（Buffer D），因此，无论是ssDNA还是dsDNA均可以有效的作为扩增底物。以1ng的环状质粒模板，在2h内可以获得3μg的扩增产物。以10ng的genomic DNA（100～200kb）为模板，可获得1～2μg的产物。扩增终产物为大分子量的网状dsDNA，其可用于酶切、测序与再连接。
| 组分 | 规格 |
| 10×phi29 Buffer | 150μL |
| Buffer D | 150μL |
| Buffer N | 150μL |
| Modi-phi29 DNA Pol(10U/μL) | 50μL |
| RealPrimase Pol | 50μL |
| 10mM dNTP | 75μL |
| RNase-Free H2O | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
10×phi29 Buffer、Buffer D、Buffer N含有高浓度的盐，实验时务必做好防护。皮肤和眼睛接触后，立即大量清水清洗，并就医。
- 模板变性与中和
漩涡混合均匀后，室温放置3min后，立即加入2.5μL Buffer N进行中和（此时总体积为7.5μL）。成分 用量 Template DNA（0.01～10ng/μL） 2.5μL Buffer D 2.5μL - 模板DNA可以是纯化的质粒、gDNA、菌液、培养细胞。
- 变性反应采用碱变性方法，因此变性时间不宜超过5min，过长的时间会造成模板损伤。
- 模板DNA可以是纯化的质粒、gDNA、菌液、培养细胞。
- RCA扩增反应
漩涡混合均匀后，放置于30℃恒温扩增2h。必要情况下，65℃ 10min进行失活反应。产物4℃短期保存（<3天），或-20℃长期保存。成分 用量 第一步中和产物 7.5μL 10×phi29 Buffer 2.5μL 10mM dNTP 1.25μL RealPrimase 1μL Modi-phi29 DNA Pol(10U/μL) 1μL RNase-Free H2O 11.75μL 总体积 25μL - 过长的孵育时间会增加产物量，但同时可能会导致非特异扩增。
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